α 与 β 地 中海贫血基因检测试剂盒体外诊断试剂产品注册技术审评报告（2025年最新版）

一、产品概述

（一）产品主要组成成分

建库试剂的主要组成成分如下：

测序试剂的主要组成成分如下：

注：不同批号试剂盒中各组分不能互换。

（二）产品预期用途

本产品用于体外定性检测人外周静脉全血样本中的地中海贫血基因突变，包括α-珠蛋白基因的4种缺失：--SEA、-α3.7、-α4.2与--THAI；3种点突变：αCSα(Hb CS)、αQSα(Hb QS)与αWSα(HbWestmead)及β-珠蛋白基因的16 种点突变：-30 (T>C)、-32(C>A)、-28(A>G)   、-29(A>G)   、Cap+40-43(-AAAC)    、Initiation codon(ATG>AGG)   、CD14/15(+G)   、CD17(AAG>TAG)   、CD26(GAG>AAG)   、CD27/28(+C)   、CD41/42(-TTCT)    、CD43(GAG>TAG)、CD71/72(+A)、IVS-I-1(G>T)、IVS-I-5(G>C)、IVS-II-654(C>T)。其对应的HGVS命名见下表。

表1.试剂盒范围内的23 种突变与HGVS命名对应表

本试剂盒用于 α-与 β-地贫的辅助诊断(遗传诊断)，检测结果不作为患者临床诊断的唯一依据，仅供临床参考。

（三）产品包装规格

建库试剂：产品编号R1010，规格：96 人份/盒。

测序试剂：产品编号R4001，规格：1次反应/测试，1测试/盒。

（四）产品检验原理

本试剂盒是基于第三代测序技术平台，利用单分子实时DNA测序技术(SingleMoleculeReal-Time(SMRT))。针对人全血样本，通过在各突变位点附近设计引物，直接从全血样本中对目标DNA区域开展长片段扩增，在目标DNA长片段扩增产物两端连接接头，使用消化酶去除非环状片段，最终获得哑铃状文库。试剂盒配套使用基因测序仪Sequel®IICNDx，构建好的哑铃状文库结合测序引物与酶，在SMRTCell的纳米小孔(ZMW)中开展单分子测序。测序后的基因序列比较到参考基因序列上，

通过生物信息软件研究，可以准确识别携带基因突变的DNA序列，获得相关基因突变信息。

二、临床前研究概述

（一）主要原材料

1.主要原材料的选择

本试剂盒的主要原材料包括反应酶、接头、引物以及测序反应通用试剂原料等，以上原材料均为外购。

申请人对主要原材料开展了供应商的选择，制定了各主要原材料的质量要求并经检验合格。

2.企业参考品与质控品的设置情况

企业参考品包括：企业阴性参考品、企业阳性参考品与企业检测限参考品。

其中企业阴性参考品共12 个，包括野生型及检测范围外的突变类型；企业阳性参考品共26 份，涵盖该产品可检测出的所有突变类型；企业检测限参考品共26 份，涵盖该产品可检测出的所有突变类型。

试剂盒包括2份阳性质控品与 1份阴性质控品，用于检测过程的质量控制。阴、阳性质控品均为人细胞系基因组DNA样本，阳性质控品包括该产品检测范围内的各种突变类型，即：α-珠蛋白基因缺失、α-珠蛋白基因点突变，以及 β-珠蛋白基因点

突变；阴性质控品为野生型人细胞系基因组DNA。

（二）生产工艺及反应体系研究

申请人通过研究确定最佳的生产工艺及反应体系，包括：连接酶与连接液的配液工序、分装工序、组装工序等。

申请人对样本用量、试剂用量、反应条件、质控标准、测序反应条件等开展研究。

（三）研究性能评估

研究性能评估内容主要包括：准确度、精密度、检出限、研究特异性等。申请人提交了有效运行的质量管理体系下生产的三批产品，在适用机型上开展的研究性能评估资料。

在准确度性能评估中，申请人按照基于临床外周静脉全血样本、细胞系基因组 DNA、质粒等开展研究，样本涵盖野生型、检测范围内所有检测位点的杂合突变型，同时纳入了部分纯合突变型。各样本检测结果均与已上市检测试剂检测结果一致。

在精密度性能评估中，申请人使用临床样本，在正常浓度以及检出限浓度两个梯度下开展研究，通过对批次内/间、试验日内/间、不同操作者间、不同仪器间、不同实验室间精密度开展评价，结果表明试剂盒精密度性能良好。

在交叉反应性能评估中，申请人使用涵盖同源序列、假基因、其他类型交叉反应序列或检测范围外基因与位点等样本进

行研究，检测结果均未检出试剂盒检测范围内的变异类型，表明该试剂盒与上述变异类型不产生交叉反应。

在干扰试验中，申请人使用代表性 α  缺失型突变、代表性α 点突变、代表性 β   点突变与野生型（阴性）样本在弱阳性 DNA水平开展抗干扰能力评估。通过对样本添加干扰物质并开展检测，结果表明胆红素浓度≤684 μmol/L、甘油三酯浓度≤37 mmol/L、血红蛋白浓度≤200 g/L、白蛋白浓度≤60 g/L、 EDTA•K2   浓度≤ 2.5mg/mL、甲磺酸去铁胺浓度≤1.6 mg/mL时，对本产品检测结果无干扰。

在检出限性能评估中，申请人使用包括检测范围内全部突变位点的杂合型样本，对最低检出限与最高检出限开展研究。确定DNA上样量最低检出限为3ng，最高检出限为300ng。申请人使用人基因组DNA混合模拟样本，对嵌合体检出能力开展研究，结果显示本产品可检测的最低嵌合比例为30%。

（四）阳性判断值研究

申请人按照基于了 480例外周静脉全血样本开展阳性判断值确定研究，研究使用二分类统计模型对检测值开展研究，进而确定点突变及缺失型变异的阳性判断值。

按照基于235例外周静脉全血样本开展阳性判断值的验证，依据阳性判断值判断的检测结果与已上市试剂检测结果一致率为

100%，说弄清楚定的阳性判断值设置可靠，适用于试剂盒检测范围内突变类型的结果判断。

研究确定的阳性判断值为：

1.α缺失型--SEA、-α3.7、-α4.2与--THAI  四者之一判断值≥5%，其他三者＜5%，同时WT(野生型或非缺失)判断值≥5%，判定为对应α 缺失型杂合突变。

2.α缺失型--SEA、-α3.7、-α4.2与--THAI四者之一判断值≥5%，其他三者＜5%，同时WT判断值＜5%，判定为对应的α 缺失型纯合突变。

3.α缺失型--SEA、-α3.7、-α4.2与--THAI四者之二判断值≥5%，四者剩余的两个判断值＜5%，同时WT判断值＜5%，判定为对应四者之二的α 缺失型双杂合突变。

4.α缺失型--SEA、-α3.7、-α4.2与--THAI  四者同时判断值＜5%，同时WT判断值≥5%，判定为αα/αα,未检出α 缺失型。

5.Mutationratio≥20%，且≤80%，判定为对应杂合点突变；

6.Mutationratio＞80%，判定为对应纯合点突变；

7.Mutationratio＜20%时，判定为N，表示未检出检测范围内的突变。

（五）稳定性研究

申请人开展的稳定性研究，包括实时稳定性、开瓶与冻融稳定性、运输稳定性等。

研究结果表明：建库试剂于-20  ℃±5℃密闭保存，有效期12个月。

测序试剂A于-20℃±5℃保存，测序试剂B于2℃~8℃保存，测序试剂 C  于-20℃±5℃保存，测序试剂 D  于 15℃~30℃保存；有效期6 个月。

样本稳定性与试剂运输及冻融研究结果支持说明书声称。

三、临床评价概述

申请人在广东省妇幼保健院、柳州市妇幼保健院、广州医科大学附属第三医院共三家临床试验机构开展了临床试验。临床试验设计为试验体外诊断试剂相对于他方法学的已上市同类产品开展比对。临床试验入组受试者为具有地贫症状与/或体征，或血液学表现为小细胞低色素、血红蛋白研究异常的疑似地贫患者与携带者；需与地贫开展鉴别诊断的其他疾病患者，如：缺铁性贫血、铁粒细胞性贫血或先天性红细胞生成异常性贫血等。样本类型为外周静脉全血样本。临床试验共入组1588例受试者，阳性病例1444 例，其中包括α-珠蛋白基因突变型231 例，α-珠蛋白基因缺失型743例，β-珠蛋白基因突变型 602例，对于常见突变位点，病例数满足统计学要求。

临床试验结果显示：针对 α-珠蛋白基因突变，试验体外诊断试剂与比较试剂比较，阳性符合率为100%（95%CI：98.36%，100%）、阴性符合率为100%（95%CI：99.72%，100%）；针对α-珠蛋白基因缺失，试验体外诊断试剂与比较试剂比较，阳性符合率为100%（95%CI：99.49%，100%）、阴性符合率为100%（95%CI：99.55%，100%）；针对β-珠蛋白基因突变，试验体外诊断试剂与比较试剂比较，阳性符合率为100%（95%CI：99.37%，100%）、阴性符合率为100%（95%CI：99.61%，100%）。结果表明试验体外诊断试剂与比较试剂具有良好的检测一致性。

，临床试验结果显示该产品临床性能满足技术审评要求。

四、产品受益风险判定

按照申请人提供的申报资料，经综合评价，在目前认知水平上，认为该产品的上市为适用人群带来的受益相较而言更多风险。尽管目前认为该产品的受益相较而言更多风险，但为保证用械安全，基于对主要剩余风险的避免，需要在说明书中提示以下信息：

1.该检测结果仅供参考，不单独作为确诊或排除病例的依据。阴性结果不能排除检测范围外的其他变异或未知变异，其结果的确认应结合临床开展综合判断。

2.警示及注意事项：该试剂盒说明书中弄清楚了该试剂盒检测方法的局限性及使用中的注意事项。