本产品是NTRK1/NTRK2/NTRK3基因融合检测试剂盒（可逆末端终止测序法），属于第三类体外诊断试剂，由南京世与医疗器械有限公司申请注册。该试剂盒用于定性检测实体瘤患者福尔马林固定石蜡包埋（FFPE）组织样本中的NTRK1、NTRK2与NTRK3基因融合变异，作为NTRK抑制剂恩曲替尼的伴随诊断工具。检测结果需结合临床其他信息综合判定，不应作为唯一决策依据。
产品概述
产品主要组成成分如下：
组分编号 | 组分名称 | 主要组成成分 |
|---|---|---|
B1 | PCA修复缓冲液 | Mg²⁺、Tris、dNTP |
E1 | PCA修复反应液 | DNA聚合酶、多核苷酸激酶 |
E2 | PCA连接酶 | DNA连接酶 |
B2 | PCA连接缓冲液 | PEG6000、Mg²⁺、Tris |
A1 | PCA通用接头 | 寡核苷酸 |
IP01-IP12 | PCA文库扩增引物1-12 | 寡核苷酸 |
IP01-IP24 | PCA文库扩增引物1-24 | 寡核苷酸 |
IP01-IP36 | PCA文库扩增引物1-36 | 寡核苷酸 |
E3 | PCA PCR扩增反应液 | DNA聚合酶 |
P1 | PCA富集扩增引物 | 寡核苷酸 |
P2 | PCA富集探针 | 寡核苷酸 |
B3 | PCA DNA封闭液 | 寡核苷酸 |
S1 | PCA封闭序列 | 寡核苷酸 |
B4 | PCA杂交缓冲液1 | 四甲基氯化铵 |
B5 | PCA杂交缓冲液2 | 甲酰胺 |
W1 | PCA清洗缓冲液1 | 十二烷基硫酸钠 |
W2 | PCA清洗缓冲液2 | 柠檬酸钠 |
W3 | PCA清洗缓冲液3 | 柠檬酸钠 |
W4 | PCA清洗缓冲液4 | 乙二胺四乙酸 |
BW | PCA磁珠清洗液 | 柠檬酸钠 |
MB | PCA磁珠 | M270链霉亲与素磁珠 |
NC | PCA阴性对照品 | 健康人细胞系DNA |
PC | PCA阳性对照品 | 健康人细胞系DNA、TPM3-NTRK1融合细胞系DNA与NTRK2野生型质粒、QKI-NTRK2融合质粒、NTRK3野生型质粒、ETV6-NTRK3融合质粒 |
注：同一组分不同批号不能混用；PCA为Pan-Cancer缩写。
产品包装规格包括12人份/盒、24人份/盒与36人份/盒。
产品检验原理基于DNA探针捕获技术：从FFPE样本提取核酸DNA后，通过片段化、加接头与PCR扩增制备文库，再使用特异性DNA探针杂交捕获目标区域（包括外显子与内含子区域），经磁珠富集后，开展高通量测序，并通过生物信息学软件研究变异。试剂盒含阴/阳性对照品，用于质控。
临床前研究概述
主要原材料为外购，包括富集探针、酶类、磁珠等，经供应商筛选与质量控制。企业参考品设置如下：
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阳性参考品：2份，含NTRK1/NTRK2/NTRK3不同融合类型与丰度样本。
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阴性参考品：1份，无变异样本。
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最低检测限参考品：1份，含检出限水平融合样本。
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重复性参考品：3份，包括阳性与阴性参考品。
生产工艺与反应体系经优化，确定最佳条件。研究性能评估结果如下：
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准确性：与全外显子组测序比较，阳性符合率与阴性符合率均为100%。
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最低检测限：肿瘤细胞含量≥20%时，50ng DNA中融合变异频率低至2%。
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精密度：批次内/间、不同操作者、仪器与实验室间精密度良好。
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研究特异性：无交叉反应；干扰物如福尔马林、血红蛋白等无影响。
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肿瘤细胞含量：≥10%可检出，建议≥20%。
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核酸提取：配套试剂符合要求。
阳性判断值通过ROC曲线法确定：嵌合reads数≥4为阳性。
稳定性研究表明，产品在-20℃±5℃（磁珠2~8℃）下有效期10个月，运输与使用稳定性符合要求。
临床评价概述
临床试验在7家机构开展，共纳入2422例FFPE样本，其中NTRK融合阳性101例。与全外显子组测序比较结果：
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阳性符合率：98.02%（95%CI:93.07%,99.46%）。
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阴性符合率：99.74%（95%CI:99.44%,99.88%）。
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总符合率：99.67%（95%CI:99.35%,99.83%）。
桥接试验针对恩曲替尼伴随诊断，纳入67例阳性样本与157例阴性样本，与CTA（比较方法）结果：
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阳性符合率：92.54%（95%CI:83.69%,96.77%）。
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阴性符合率：99.36%（95%CI:96.48%,99.89%）。
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总符合率：97.32%（95%CI:94.28%,98.77%）。
桥接病例客观缓解率（ORR）为71.0%，与药物临床试验一致。
产品受益风险判定
受益：作为恩曲替尼伴随诊断，筛选用药人群，使患者及时治疗。
风险评估：检测结果受样本来源、操作等因素影响，说明书已提示局限性，如样本要求、污染风险等。剩余风险防控措施包括弄清楚预期用途与注意事项。
综合评价意见
产品符合医疗器械法规要求，安全性、有效性达标，建议准予注册。
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