本产品是人EGFR/ALK/ROS1/MET/KRAS基因突变检测试剂盒（多重荧光PCR法），属于第三类体外诊断试剂，由厦门艾德生物医药科技股份有限公司申请注册。该试剂盒用于体外定性检测非小细胞肺癌（NSCLC）患者福尔马林固定石蜡包埋（FFPE）样本DNA/RNA中人类EGFR、KRAS、ALK、ROS1基因突变与MET基因14号外显子跳跃突变，具体突变位点信息详见产品说明书。其中，EGFR基因19号外显子缺失突变与L858R突变可用于盐酸厄洛替尼片与甲磺酸奥希替尼片的伴随诊断；EGFR基因T790M突变可用于甲磺酸奥希替尼片的伴随诊断；ALK基因融合与ROS1基因融合可用于克唑替尼胶囊的伴随诊断；MET基因外显子14跳跃突变可用于谷美替尼片与盐酸特泊替尼片的伴随诊断；KRAS基因G12C突变可用于枸橼酸戈来雷塞片与格索雷塞片的伴随诊断。产品包装规格为10测试/盒，检验原理基于多重荧光PCR法，按照基于ADx-ARMS技术检测DNA突变，并通过两步RT-qPCR方法检测RNA基因融合。
产品概述
产品主要组成成分包括RNA基因融合检测与DNA基因突变检测两部分。RNA基因融合检测组成成分包括LET反应条A（LET A）、LET逆转录液I、LET逆转录液II、LET逆转录酶、LET混合酶A与LET阳性对照A；DNA基因突变检测组成成分包括LET反应条B（LET B）、LET混合酶B与LET阳性对照B。试剂盒按照基于8联PCR管设计，具体组成详见下表。
LET反应条A与B的管号及检测目标如下：
- •
LET反应条A：①号管检测ALK基因融合（FAM、VIC信号），⑤⑥号管检测ROS1基因融合（FAM、VIC信号），⑦号管检测MET基因14号外显子跳跃突变（FAM、VIC信号）。
- •
LET反应条B：①~③号管检测EGFR基因突变（FAM、VIC、ROX信号），⑤号管检测KRAS基因突变（VIC、ROX信号），⑧号管为外控（FAM、ROX信号）。
产品预期用途详见说明书，伴随诊断用途的基因变异类型及靶向药物如下：
检验原理：RNA检测通过两步RT-qPCR方法，DNA检测通过ADx-ARMS®技术，利用特异引物与荧光信号实现突变检测，PCR系统含UNG酶防污染。
临床前研究概述
主要原材料为外购，包括引物、探针、酶类等，经功能性试验筛选合格。企业参考品设置如下：
- •
阳性参考品：142支，涵盖所有可检出融合/突变类型。
- •
阴性参考品：20支，包括临床FFPE样本与非人基因组样本。
- •
检测限参考品：45支。
- •
精密度参考品：28支。
生产工艺与反应体系经优化确定。研究性能评估结果：
- •
准确度：阳性/阴性符合率均为100%。
- •
精密度：批内、批间、人员间等精密度符合率100%，变异系数≤5%。
- •
最低检测限：3300拷贝FFPE DNA中1~5%基因突变、60~600 ng FFPE RNA中150拷贝RNA可检出。
- •
研究特异性：无交叉反应；干扰物如药物、血红蛋白等无影响。
- •
核酸提取性能：配套试剂符合要求。
阳性判断值通过ROC曲线确定，详见下表：
- •
LET反应条A：FAM信号Ct<30为阳性（MET基因Ct<27）。
- •
LET反应条B：FAM/ROX信号分阳性A区（Ct<30）、阳性B区（Ct 30~33且△Ct符合要求），否则为阴性。
稳定性研究显示，产品在-20±5℃下有效期6个月，运输、开瓶稳定性符合要求。
临床评价概述
临床试验在4家机构开展，分为六部分：
- 1.
与二代测序比较：纳入862例样本，EGFR、ALK、ROS1、MET、KRAS基因检测阳性符合率98.1%~100%，阴性符合率99.6%~100%。
- 2.
与原研伴随诊断试剂比较：EGFR、ALK、ROS1基因检测阳性符合率100%，阴性符合率99.1%~100%。
- 3.
桥接试验（盐酸特泊替尼片）：416例样本，阳性符合率99.3%，阴性符合率98.2%；ORR为53.4%。
- 4.
桥接试验（谷美替尼片）：217例样本，阳性/阴性符合率均为100%；ORR为65.2%。
- 5.
同步开发（枸橼酸戈来雷塞片）：117例KRAS G12C突变患者，ORR为49.6%。
- 6.
同步开发（格索雷塞片）：119例KRAS G12C突变患者，ORR为52.0%。
产品受益风险判定
受益：作为多靶点伴随诊断试剂，筛选用药人群，使NSCLC患者及时治疗。
风险评估：说明书已提示样本质量、操作规范等风险控制措施，剩余风险通过警示信息避免。
综合评价意见
产品符合医疗器械法规要求，安全性、有效性达标，建议准予注册。
1189
