一、产品概述
（一）产品主要组成成分
由扩增试剂与对照试剂组成。（具体详见说明书）
（二）产品预期用途
本产品用于体外定性检测来自结核病患者的结核分枝杆菌复合群阳性的痰液样本与培养物样本中结核分枝杆菌的吡嗪酰胺耐药基因突变。本产品通过对结核分枝杆菌复合群pncA基因全基因共187个氨基酸密码子区域内（561bp，吡嗪酰胺耐药决定区）与启动子区域-1～-16（16bp）的突变开展吡嗪酰胺耐药基因突变检测。本产品无法弄清楚具体突变类型。
本产品可用于吡嗪酰胺耐药结核病的辅助诊断。
（三）产品包装规格
48测试/盒
（四）产品检验原理
按照基于荧光PCR熔解曲线法，其基本原理是：在 PCR体系中加入两端分别标记有荧光基团与淬灭基团的探针，在 PCR 过程中扩增出与探针序列互补的单链寡核苷酸序列，在扩增完成后增加熔解曲线研究过程，同时实时监测荧光值的变化，通过计算荧光值与温度的负导数，可获得探针与该序列杂交产物的熔解曲线，并得出 Tm值（熔点），从而推得该序列突变信息。要是靶序列与探针完全匹配，则探针与该序列杂交的 Tm值最高；要是探针与序列不完全匹配，例如序列出现点突变、插入或者缺失，则探针与该序列杂交的 Tm值低于探针与完全匹配序列杂交的 Tm值。Tm值的减少程度与点突变类型、插入或缺失碱基数量以及突变位点的位置密切相关。同时在体系中 D 管对结核分枝杆菌gyrB基因开展检测，以辅助开展耐药判读。此外加入外源内标（拟南芥管家基因 SUC2 作为内标基因），对扩增体系开展质量控制。
二、临床前研究概述
（一）主要原材料
1.主要原材料的选择
主要原材料包括引物、探针、聚合酶、UNG酶、dNTPs、质粒等。主要原材料聚合酶与质粒为自产，其他原材料均为外购。引物、探针为申请人自行设计后由专业合成公司合成。申请人选择有资质的供应商提供原料，通过功能性试验筛选出最佳原材料与供应商，制定了各主要原材料的质量标准并经检验合格。
2. 企业参考品与对照品的设置情况
企业参考品包括阳性参考品、阴性参考品、最低检出量参
考品与重复性参考品。阳性参考品34支，由不同浓度与耐药突变类型的培养物与质粒DNA样本组成。阴性参考品10支，由不同类型的野生型培养物样本组成。最低检出量参考品 1 支。重复性参考品7支，由不同浓度与突变类型培养物样本组成。
还设置了阳性对照品与阴性对照品，用于检测过程中试剂与仪器的质量控制。其中阳性对照品为野生型靶基因质粒 DNA构成，阴性对照品为不含任何靶基因的溶液。
（二）生产工艺及反应体系研究
申请人通过对试剂主要生产工艺的研究，确定了最佳生产工艺。
申请人对反应体系中引物、探针、聚合酶、UNG酶与dNTPs 等的浓度与/或用量开展了优化，并对反应体系的扩增程序、变性时间、退火温度与时间、开拓温度与时间、扩增循环数、样本用量等开展了优化与验证。此外，对样本核酸的提取方法与取样量开展了验证，最终确定了最佳反应体系。
（三）研究性能评估
研究性能评估内容主要包括：准确度、精密度、最低检测限、研究特异性、核酸提取试剂性能等研究。
准确度研究中，申请人使用三批成品试剂盒，检测阴性（野生型）样本与阳性（突变型）样本。结果表明阳性符合率与阴
性符合率均为100%，试剂盒的准确性符合设计要求。
精密度研究中，申请人使用三批成品试剂盒，对不同浓度（弱阳性样本、中等阳性样本）的不同型别的阳性样本与阴性样本，开展了重复性核酸提取与检测等在内的精密度研究，评估了试剂盒批内、批间及检测日内、日间、操作者间精密度。结果显示试剂盒批内/批间、日内/日间、不同操作者之间均有着很好的检测重复性，变异系数CV均不相较而言更多5%，精密度良好，符合设计要求。
最低检测限研究中，申请人使用三批成品试剂盒，检测系列浓度梯度的野生/突变型样本及不同耐药比例的样本，将达到95%阳性检出率的最低浓度水平作为确定的最低检出限，并使用三批成品试剂盒检测 16份临床菌株样本与 11份制备痰液，以及24份50%以上耐药比例的临床菌株样本与11份50%以上耐药比例的制备痰液，开展最低检测限与耐药比例的最低检测限验证，最终确定该产品最低检测限为102CFU/mL，异质性检测能力为50%及以上的突变比例。
研究特异性研究中，申请人开展了交叉反应研究及干扰物质研究。在交叉反应研究中，申请人使用三批成品试剂盒，针对不同浓度的野生型结核分枝杆菌样本、各种突变型结核分枝杆菌样本、其他分枝杆菌（堪萨斯分枝杆菌、海分枝杆菌、土
地分枝杆菌、次要分枝杆菌、溃疡分枝杆菌、戈登分枝杆菌、蟾蜍分枝杆菌、鸟分枝杆菌、瘰疬分枝杆菌、苏加分枝杆菌、龟分枝杆菌、脓肿分枝杆菌、耻垢分枝杆菌、偶然分枝杆菌、胃分枝杆菌、胞内分枝杆菌、草分枝杆菌等）样本及其他病原体（肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、大肠杆菌、表皮葡萄球菌、隐球菌、金黄色葡萄球菌、诺卡氏菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌、烟曲霉、人流感病毒A/B型、人副流感病毒I/II/III型等）样本开展了交叉反应评价。结果显示本试剂盒可正确检测野生型结核分枝杆菌与突变型结核分枝杆菌，与上述其他分枝杆菌与其他病原体不产生交叉反应。在干扰试验中，申请人使用三批成品试剂盒，对样本中的干扰物质开展了评价。结果显示内源性血液30%(v/v)、粘液 30%(v/v)、人细胞（1×106/L）与外源性药物利福平、异烟肼、乙胺丁醇、阿莫西林、羟甲唑啉、莫匹罗星、吡嗪酰胺、扎那米韦、地塞米松及液体培养基 等，对本试剂检测不产生干扰。
核酸提取试剂性能研究中，申请人使用临床样本比较评估了产品配套使用的核酸提取试剂盒的提取效果，结果显示配套使用的核酸提取试剂盒的核酸提取效率满足产品使用需求。
（四）阳性判断值或参考区间研究
申请人按照基于本产品与配套仪器对收集的野生型临床样本与突变型临床样本开展检测，获得试剂盒各检测通道的野生型与突变型的熔解峰 Tm值，通过对相应样本的数据分布开展统计研究并计算标准偏差及 Tm差值确定野生型样本与突变型样本的阳性判断值。然后进一步按照基于483例野生型临床样本与 533例突变型临床样本开展了阳性判断值的验证，结果显示确定的阳性判断值符合率良好。
（五）稳定性研究
申请人对本产品的实时稳定性、冻融稳定性、运输稳定性以及样本稳定性等开展了系统的研究，确定了在各种条件下本产品及样本的有效保存时间。
实时稳定性：三批试剂盒分别储存于-20±5℃与-70℃避光条件下，分别于不同时间点对试剂盒的外观、野生型/突变型参考品符合率、最低检测限、精密度、阳性/阴性对照等开展检测，确定试剂盒在-20±5℃与-70℃以下避光条件下，可稳定保存 18个月。
还对产品的冻融稳定性、运输稳定性以及样本稳定性分别 开展了研究。结果显示，产品的性能均能满足产品说明书的声称。
三、临床评价概述
申请人在广州市胸科医院、福建省福州结核病防治院、山东省公共卫生临床中心共 3 家临床试验机构完成了临床试验。按照基于试验体外诊断试剂与临床参考标准（药敏试验）开展比较研究，并同时与一代测序开展比较，确认本产品的临床性能。样本类型包括痰液与培养物。临床试验共包括两部分：
第一部分：试验体外诊断试剂与临床参考标准（药敏试验）的比较研究
针对痰液样本，共纳入720例样本，其中阳性179例，阴性 541例。试验结果显示，试验体外诊断试剂与临床参考标准的临床灵敏度为94.41%（95%CI：90.02%，96.94%），临床特异 度为98.34%（95%CI：96.87%，99.12%）。以上结果显示两者检 测结果之间具有良好的一致性。
针对培养物样本，共纳入 877 例样本，其中阳性样本 253例，阴性样本 624 例。试验结果显示，试验体外诊断试剂与临床参考标准的临床灵敏度为93.28%（95%CI：89.50%，95.76%）， 临床特异度为98.56%（95%CI：97.28%，99.24%）。以上结果显 示两者检测结果之间具有良好的一致性。
第二部分：试验体外诊断试剂与一代测序的比较研究
针对痰液样本，共纳入 720例样本，其中阳性 181例，阴性 539例。试验结果显示，试验体外诊断试剂与一代测序的临床灵敏度为98.34%（95%CI：95.24%，99.44%），临床特异度为100%（95%CI：99.29%，100%）。以上结果显示两者检测结果之 间具有良好的一致性。
针对培养物样本，共纳入 877例样本，其中阳性249例，阴性 628例。试验结果显示，试验体外诊断试剂与一代测序的临床灵敏度为98.39%（95%CI：95.94%，99.37%），临床特异度为100%（95%CI：99.39%，100%）。以上结果显示两者检测结果之间具有良好的一致性。
，申报产品的临床试验资料符合技术审评要求。
四、产品受益风险判定
依据YY/T 0316-2016《医疗器械风险管理对医疗器械的应用》，对该产品开展风险研究。
（一）受益评估
结核病是由结核分枝杆菌感染引起，严重危害人体健康的传染病。吡嗪酰胺药物是用于治疗结核病的一线抗结核药物，对结核分枝杆菌吡嗪酰胺的耐药性情况开展检测，对耐药结核病的诊疗具有较大的意义。本产品临床应用的主要受益在于：按照基于分子生物学方法，能较快地对结核病患者开展结核分枝杆菌吡嗪酰胺耐药性检测，以辅助临床对吡嗪酰胺耐药的耐药结核病的诊断。依据现有的临床试验结果，本产品对结核分枝杆菌吡嗪酰胺耐药检测的临床灵敏度与特异度良好。
（二）风险评估
申请人对已知危险（源）开展风险评价，按照风险可接受准则判断每个危险（源）的风险是否达到可接受水平，对可靠可行减少的风险、不经过风险/收益研究既判定为不可接受的风险采取控制措施，并对具体措施开展实施验证，同时重新对采取措施后的风险开展估计，确认其风险水平是否可接受。但为保证用械安全，基于对主要剩余风险的避免，需要在说明书中提示以下信息：
1.预期用途：本产品用于体外定性检测来自结核病患者的结核分枝杆菌复合群阳性的痰液样本与培养物样本中结核分枝杆菌的吡嗪酰胺耐药基因突变。本产品通过对结核分枝杆菌复合群pncA基因全基因共 187个氨基酸密码子区域内（561bp，吡嗪酰胺耐药决定区）与启动子区域-1～-16（16bp）的突变开展吡嗪酰胺耐药基因突变检测。本产品无法弄清楚具体突变类型。
本产品可用于吡嗪酰胺耐药结核病的辅助诊断。
2.警示及注意事项：产品说明书中介绍了该产品检验方法的局限性及使用中的注意事项。
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