人 EGFR/ALK/ROS1/MET/KRAS/RET 基因突变检测试剂盒注册技术审评报告（2026年版）

一、产品概述

（一）产品主要组成成分

本试剂盒包括两个部分：RNA 基因融合检测与 DNA 基因突变检测。

RNA 基因融合检测组成成分包括 LET 反应条A(LET A) 、 LET 逆转录液 I 、LET 逆转录液 II 、LET 逆转录酶、LET 混合酶 A 与 LET 阳性对照 A 。LET 逆转录液 I、LET 逆转录液 II 与LET  逆转录酶用于样本 RNA  逆转录成 cDNA；LET  反应条A(LET  A)与 LET 混合酶 A 用于样本 cDNA 扩增检测。PCR 反应液已预先分装于 PCR 8 联管(LET A)中，8 联管内装有各自相应的 PCR  反应液，RNA  基因融合检测由①号管与⑤~ ⑧号管FAM 信号指示，①号管与⑤~ ⑧号管 VIC 信号作为内标，扩增的是人类 GUSB 基因保守区段，用于指示 RNA 样本质量与质控实验是否异常，详见表 1 与表 2。

DNA 基因突变检测组成成分包括 LET 反应条 B(LET  B) 、 LET 混合酶 B 与 LET 阳性对照 B。LET 反应条 B(LET B)与 LET混合酶 B 用于样本 DNA 扩增检测。PCR 反应液已预先分装于PCR 8 联管(LET B)中，8 联管内装有各自相应的PCR 反应液，

DNA  基因突变检测由①~ ③号管 FAM  与 ROX  信号及⑤号管ROX 信号指示，①~ ③号管与⑤号管 VIC 信号作为内标，扩增的是 EGFR、KRAS 与 BRAF 基因保守区段，用于指示DNA 样本质控实验是否异常，DNA 样本质量由⑧号管FAM 与 ROX 信号指示，详见表 1 与表 3。

表 1    试剂盒组成

表 2    LET 反应条 A 组成

表 3    LET 反应条 B 组成

说明：不同批号试剂盒中各组分不可相互混用。

（二）产品预期用途

本试剂盒用于体外定性检测非小细胞肺癌（NSCLC）患者福尔马林固定石蜡包埋（FFPE）样本 DNA/RNA 中人类 EGFR、 KRAS 、ALK 、ROS1 、RET 基因突变与 MET 基因 14 号外显子跳跃突变，具体突变位点信息详见产品说明书。其中 EGFR 基因 19 号外显子缺失突变与L858R 突变可用于盐酸厄洛替尼片与甲磺酸奥希替尼片的伴随诊断；EGFR 基因T790M 突变可用于甲磺酸奥希替尼片的伴随诊断；ALK 基因融合与 ROS1 基因融合可用于克唑替尼胶囊的伴随诊断；MET 基因外显子 14 跳跃突变可用于谷美替尼片与盐酸特泊替尼片的伴随诊断；KRAS基因 G12C  突变可用于枸橼酸戈来雷塞片与格索雷塞片的伴随诊断；RET 基因融合可用于塞普替尼胶囊的伴随诊断。具体信息详见表 4。

表 4    伴随诊断用途的基因变异类型及相应的靶向药物

（三）产品包装规格

10 测试/盒。

（四）产品检验原理

本试剂盒以 NSCLC FFPE 样本 RNA 与 DNA 为检测对象。

RNA 检测是通过两步 RT-qPCR 方法对样本 RNA 中基因融合开展检测，均由 FAM 信号指示；RNA 各检测管均含有扩增人类管家基因的检测试剂，用于监控样本 RNA  质量与加入情况，均由 VIC 信号指示。

DNA 检测是通过 ADx-ARMS®技术对样本 DNA 中基因突变开展检测，由 FAM  与 ROX  信号分别指示不同突变位点。 ADx-ARMS®技术是针对突变位点设计特异的突变检测引物， PCR 扩增时，因为该引物3'末端的碱基与突变型模板完全配对，引物开拓并扩增出突变模板；而与野生型模板因为不能完全配对，引物的开拓被阻断，野生型模板扩增被抑制，从而实现基因突变的检测。

本试剂盒 PCR 扩增反应系统同时含有 UNG 酶，可以选择性断裂含有 dU 的PCR 片段中的尿嘧啶糖苷键，有效减少因PCR产物污染产生的假阳性。

二、临床前研究概述

（一）主要原材料

1.主要原材料的选择

主要原材料包括引物、探针、DNA 聚合酶、逆转录酶、UNG酶与 dNTP，这些主要原材料均为外购方式获得。

自行设计的引物、探针委托专业的合成公司合成， 并经HPLC 纯化获得；DNA 聚合酶、逆转录酶、UNG 酶与 dNTPs等均由有资质的原料供应商提供。通过功能性试验， 申请人筛选出最佳原材料与供应商， 同时制定了各主要原材料质量标准并检验合格。

2.企业参考品设置情况

申请人设计了完整的企业参考品，包括阴性参考品、阳性参考品、 最低检测限参考品与精密度参考品， 除了两支阴性参考品为大肠杆菌来源的核酸外，其他参考品均按照基于临床样本制备而成。

阳性参考品共 162 支，包括试剂盒可检出所有融合类型不同融合含量与所有突变类型不同突变比例的 153 支阳性参考品及 9 支双阳性参考品。阴性参考品共 20 支，9 支为临床 FFPE阴性 RNA，9 支为临床 FFPE 阴性 DNA，另外 2 支分别为非人基因组样本（大肠杆菌） 的 RNA 与 DNA。检测限参考品共 51支，包括试剂盒可检出的所有融合/突变类型。精密度参考品共30 支，包括阴性精密度参考品、不同突变比例的阳性精密度参考品。

产品同时设置了阳性对照与阴性对照，用于检测过程中试剂盒与仪器的质量控制。

（二）生产工艺及反应体系研究

申请人对该产品反应体系的研究包括 PCR 反应体积、逆转录体积、反应液各组分与酶液等使用量研究、核酸与 cDNA 用量研究、PCR 扩增反应条件研究、循环数研究等。

通过功能性实验，确定了最佳的反应体系。申请人按照试剂盒中试剂与组件的主要生产工艺的研究结果，确定了最佳的生产工艺。

（三）研究性能评估

产品研究性能评估内容主要包括：准确度、精密度、研究特异性、最低检测限、核酸提取性能等研究。申请人提交了有

效运行的质量管理体系下生产的多批产品在适用机型上的性能评估资料。

准确度研究中，使用 3 批成品试剂盒在适用机型上对企业与国家阳性参考品与阴性参考品开展检测，检测结果显示阳性参考品符合率、阴性参考品符合率均为 100%。

精密度研究中，使用 3 批成品试剂盒在适用机型上对阴性参考品与阳性精密度参考品开展检测，评价本产品批内、批间、日内、日间、人员间、不同 PCR 仪器、不同地点与再现性精密度，结果显示检测结果符合率均为 100%，检测变异系数均不相较而言更多 5%。

最低检测限研究中，申请人使用不同核酸浓度与不同融合含量及不同突变比例的样本开展检测，按照基于 95%（n=20）的阳性检出率作为标准，初步确定产品最低检测限。然后使用 3 批成品试剂盒在适用机型上对检测限参考品开展验证。最后使用 3批成品试剂盒在适用机型上对与企业参考品不同的临床样本开展最低检测限的验证，结果满足说明书中声称。

研究特异性研究包括交叉反应研究与干扰研究，交叉反应研究包括序列相近与具有一定同源性的其他常见突变类型、 NSCLC 其他常见基因突变类型与非人类基因组基因。申请人使用 3 批试剂盒对交叉反应样本开展检测，结果显示均无交叉反应。干扰试验结果显示，临床样本中可能存在的外源干扰物质（乙醇、二甲苯、蛋白酶 K、液体石蜡、大肠杆菌、酵母菌、福尔马林）、内源性干扰物质（血红蛋白、甘油三酯）与药物（紫杉醇、培美曲塞、吉西他滨、吉非替尼、埃罗替尼、退热净、阿莫西林、头孢克罗、布洛芬）对检测结果均无影响。

申请人按照基于临床样本对核酸提取试剂盒开展了性能研究，按照与该产品的组合性能研究结果，确定核酸提取试剂符合检测需求。

（四）阳性判断值研究

阳性判断值的形成：按照基于 441 例 NSCLC FFPE 样本（用于基因融合检测）与 695 例NSCLC FFPE 样本（用于基因突变检测），使用本试剂盒开展检测，分别统计融合反应管 FAM 与突变反应管 FAM/ROX 通道 Ct 值，并计算突变管FAM/ROX 通道ΔCt 值，通过受试者工作特征（ROC） 曲线确定本产品的阳性判断值。再用 320 例临床样本对阳性判断值开展验证。最终确定阳性判断值见表 5~6。

表 5    LET 反应条 A(LET A)FAM 信号结果判定

表 6    LET 反应条 B(LET B)FAM/ROX 信号结果判定

（五）稳定性研究

申请人对产品的实时稳定性、运输稳定性、开瓶冻融稳定性与样本稳定性开展了系统的研究，确定了在各种条件下申报产品及样本的有效保存时间。

实时稳定性研究中，将 3 批试剂盒储存于规定储存条件下，分别在不同储存时间对物理性能、准确度、特异性、检测限与精密度开展考察，各项性能指标均符合要求，确定产品在 20 ± 5℃条件下，可稳定保存6 个月。

此外， 申请人对产品的开瓶冻融稳定性、运输稳定性与样本稳定性分别开展了研究。结果显示，产品性能均能满足产品说明书声称。

三、临床评价概述

申请人在北京肿瘤医院、山西省肿瘤医院、福建医科大学附属协与医院与哈尔滨医科大学附属肿瘤医院共 4 家临床机构完成了临床检测性能的试验， 同时通过桥接试验或同步开发的方式完成了伴随诊断意义的研究。本次临床试验分为如下七部分。

第一部分：按照基于试验体外诊断试剂与实验室参考方法（二代测序）开展比较试验，评价试验体外诊断试剂的临床检测性能。

针对该部分研究，入组病例以非小细胞肺癌患者为主（包括腺癌、鳞癌、腺鳞癌与大细胞癌），样本类型为 FFPE 样本。临床试验纳入统计受试者共 862 例。其中， EGFR 基因共检出阳性例数 457 例（包括 G719S 突变阳性 24 例、G719A 突变阳性 26 例、G719C 突变阳性 26 例、19del 突变阳性 195 例、S768I突变阳性 61 例、T790M 突变阳性 75 例、L858R 突变阳性 135例、L861Q 突变阳性 62 例）；ALK 基因融合阳性 106 例；ROS1基因融合阳性 87 例；MET 基因 14 号外显子跳跃突变阳性 91例。

试验结果显示：EGFR  基因突变检测结果， 阳性符合率99.6%(95%CI：98.4%，99.9%)，阴性符合率 100%(95%CI：99. 1%，100.0%)；ALK 基因融合检测结果，阳性符合率 98. 1%(95%CI： 93.3%，99.5%)，阴性符合率 99.6%(95%CI：98.8%，99.9%)； ROS1 基因融合检测结果，阳性符合率 100%(95%CI：95.6% ， 100%)，阴性符合率 99.6%(95%CI：98.9% ，99.9%)；MET 基因14  号外显子跳跃突变检测结果，阳性符合率 96.8%(95%CI： 91.0%，98.9%)，阴性符合率 100%(95%CI：99.5%，100%)。

针对 KRAS 基因 G12C 突变，临床试验纳入统计受试者共312 例。其中KRAS 基因 G12C 突变阳性79 例。试验结果显示， KRAS 基因 G12C  突变检测结果， 阳性符合率 100%(95%CI： 95.4%，100%)，阴性符合率 99.6%(95%CI：97.6%，99.9%)。

针对 RET 基因融合，临床试验纳入统计受试者共345 例。其中 RET 基因融合阳性 93 例。试验结果显示，RET 基因融合检测结果，阳性符合率 100%(95%CI：96.0%，100%)，阴性符合率 99.6%(95%CI：97.8%，99.9%)。

第二部分：按照基于试验体外诊断试剂与原研伴随诊断试剂开展比较研究，评价试验体外诊断试剂对于盐酸厄洛替尼片、甲磺酸奥希替尼片与克唑替尼胶囊的伴随诊断性能。

针对该部分研究，按照基于本产品与原研伴随诊断试剂开展一致性研究。入组病例均为非小细胞肺癌患者，主要是药物临床试验适应症人群，样本类型为 FFPE  样本。其中， EGFR  基因突变检测共纳入有效样本 341  例，其中 19del 阳性样本 79 例， EGFR L858R 阳性样本 112 例，T790M 阳性样本 72 例；ALK  基因融合检测纳入有效样本 328 例，阳性98 例；ROS1  基因融合检测纳入统计研究的有效样本 312  例，阳性 84 例。

试验结果显示：EGFR  基因突变检测结果， 阳性符合率100%(95%CI：98. 1%，100.00%)，阴性符合率 99.3%(95%CI： 96.3% ， 99.9%) ； ALK   基 因 融 合 检 测 结 果， 阳 性 符 合 率100%(95%CI：96.2%，100%)，阴性符合率 99. 1%(95%CI：96.9%， 99.8%)；ROS1 基因融合检测结果， 阳性符合率 100%(95%CI： 95.6%，100%)，阴性符合率 100%(95%CI：98.3%，100%)。

第三部分：按照基于桥接研究，评价试验体外诊断试剂对于盐酸特泊替尼片的伴随诊断性能。

针对该部分研究，按照基于本产品与 CTA 开展一致性研究，共入组药物临床试验中病例的416 例样本，样本类型为FFPE 样本。其中阳性样本 138 例，阴性样本 278 例。试验结果显示：试验体外诊断试剂与 CTA 的阳性符合率为 99.3%(95%CI：96.0% ， 100.00%)，阴性符合率 98.2%(95%CI：95.8%，99.4%)。

另外，针对药物临床试验纳入的 208 例 MET 基因 14 号外显子跳跃突变阳性的 FFPE  组织样本，本次桥接试验纳入 132例，试验体外诊断试剂检测阳性的为 131 例。对于药物临床试验中的主要评价指标，上述 131 个样本来源病例的客观缓解率（ORR）为 53.4%（95%CI：44.5%，62.2%），与药物临床试验结果基本一致；对于药物临床试验中的其他次要评价指标也开展了充分评价，结果显示，上述 131  个病例的次要评价指标的结果也与药物临床试验中结果基本一致； 同时，针对需要开展敏感性与插补研究的情况也开展了研究。

第四部分：按照基于桥接研究，评价试验体外诊断试剂对于谷美替尼片的伴随诊断性能。

针对该部分研究，按照基于本产品与 CTA 开展一致性研究，共入组药物临床试验中病例的 217 例样本，其中阳性样本 123 例，阴性样本 94 例，样本类型为FFPE 样本。试验结果显示：试验用体外诊断试剂与 CTA 的阳性符合率为 100%(95%CI：96.9%， 100.00%)，阴性符合率 100%(95%CI：96. 1%，100%)。

另外，针对药物临床试验纳入的 79 例MET 基因 14 号外显子跳跃突变阳性的 FFPE 组织样本，本次桥接试验纳入 69 例，试验体外诊断试剂检测阳性的为 69 例。对于药物临床试验中的主要评价指标，上述 69 个样本来源病例的客观缓解率（ORR）为 65.2%（95%CI：52.8% ，76.3%），与药物临床试验结果基本一致；对于药物临床试验中的其他次要评价指标也开展了充分评价，结果显示，上述 69 个病例的次要评价指标的结果也与药物临床试验中结果基本一致； 同时，针对需要开展插补研究的情况也开展了研究。

第五部分：按照基于与抗肿瘤药物同步开发的方式，评价试验体外诊断试剂对于枸橼酸戈来雷塞片的伴随诊断性能。

申请人提供了 JAB-21822-1002  IIb 期根本研究药物临床研究资料。该临床试验是评价枸橼酸戈来雷塞片单药治疗既往经治的 KRAS  G12C 突变的局部晚期或转移性非小细胞肺癌患者有效性与安全性的开放性、单臂的Ⅱb 期临床研究。在这项临床试验中，共有 117 例经中心实验室按照基于试验体外诊断试剂检测到 KRAS G12C 突变的 NSCLC 受试者纳入了有效性统计研究。多中心临床试验结果显示，FAS 人群确认的客观缓解率（ORR） 49.6%（95% CI：40.2% ，59.0%），中位缓解持续时间 14.5 个月（95%  CI：9.6 ，NE）， 中位至缓解时间 1.41 个月（最大值 9.8个月，最小值 1.2 个月），中位无进展生存期 8.2 个月（95% CI： 5.2，11.1 ）。

第六部分：按照基于与抗肿瘤药物同步开发的方式，评价试验体外诊断试剂对于格索雷塞片的伴随诊断性能。

申请人提供了 D1553-102 根本研究药物临床研究资料。该临床试验是一项开放、单臂、多中心根本性Ⅱ期研究，评估该药物在 KRAS  G12C 突变阳性的局部晚期或转移性非小细胞肺癌患者中的疗效与安全性。在这项临床试验中，共有 119 例经中心实验室按照基于试验体外诊断试剂检测到 KRAS  G12C 突变的NSCLC 受试者纳入了有效性统计研究。多中心临床试验结果显示：LAS 人群客观缓解率 52.0%（95%CI：42.8% ，61. 1%），中位缓解持续时间 12.45 个月（95% CI：8.28 ，NE），6 个月的缓解持续率 78.4%（95% CI：65. 1%，87. 1%）。

第七部分：按照基于桥接研究，评价试验体外诊断试剂对于塞普替尼胶囊的伴随诊断性能。

针对该部分研究，按照基于本产品与 CTA 开展一致性研究，共入组药物临床试验中病例的 163 例样本，样本类型为FFPE 样本。其中阳性样本 160 例，阴性样本 3 例，另外补充阴性样本 153例。试验结果显示：试验体外诊断试剂与 CTA 的阳性符合率为95.83%(95%CI：91. 15%，98.46%)，阴性符合率 100.00%(95%CI： 97.65%，100.00%)。

另外，针对药物临床试验 LIBRETTO-321 纳入的 26 例 RET基因融合阳性的 FFPE 组织样本，本次桥接试验纳入 26 例，试验体外诊断试剂检测阳性的为25 例。对于药物临床试验中的主要评价指标，上述 25 个样本来源病例的客观缓解率（ORR）为68.0%（95%CI：46.5%，85. 1%），与药物临床试验结果基本一致；针对药物临床试验 LIBRETTO-431 纳入的 212 例RET 基因融合阳性的 FFPE 组织样本，本次桥接试验纳入 109 例，试验体外诊断试剂检测阳性的为 93 例。对于药物临床试验中的主要评价指标 PFS，中位 PFS 尚未达到，上述 93 个样本来源病例的风险比（HR）为 0.320，与药物临床试验结果基本一致；对于药物临床试验中的其他次要评价指标也开展了充分评价，结果显示，上述病例的次要评价指标的结果也与药物临床试验中结果基本一致； 同时，针对需要开展敏感性与插补研究的情况也开展了研究。

，该产品临床试验设计符合《体外诊断试剂临床试验技术指导原则》的相关要求。临床试验结果显示该产品临床性能满足临床要求。

四、产品受益风险判定

按照GB/T  42062-2022 《医疗器械－风险管理对医疗器械的应用》对产品开展风险研究。

（ 一）受益评估

本试剂盒用于体外定性检测非小细胞肺癌（NSCLC）患者福尔马林固定石蜡包埋（FFPE）样本DNA/RNA中人类EGFR、 KRAS 、ALK 、ROS1 、RET基因突变与MET基因14号外显子跳跃突变，具体突变位点信息详见产品说明书。其中EGFR基因19号外显子缺失突变与L858R突变可用于盐酸厄洛替尼片与甲磺酸奥希替尼片的伴随诊断；EGFR基因T790M突变可用于甲磺酸奥希替尼片的伴随诊断；ALK基因融合与ROS1基因融合可用于克唑替尼胶囊的伴随诊断；MET基因外显子14跳跃突变可用于谷美替尼片与盐酸特泊替尼片的伴随诊断；KRAS基因G12C突变可用于枸橼酸戈来雷塞片与格索雷塞片的伴随诊断；RET基因融合可用于塞普替尼胶囊的伴随诊断。

本产品临床应用的主要受益在于：可以作为盐酸厄洛替尼片、甲磺酸奥希替尼片、克唑替尼胶囊、谷美替尼片、盐酸特泊替尼片、 枸橼酸戈来雷塞片、格索雷塞片以及塞普替尼胶囊的伴随诊断试剂对靶向用药人群开展筛选，从而让NSCLC患者获得及时的治疗。

（二）风险评估

申请人对已知危险（源）开展风险评价，按照风险可接受准则判断每个危险（源）的风险是否达到可接受水平，对可靠可减少的风险、不经过风险/收益研究即判定为不可接受的风险采取控制措施，并对具体措施实施验证， 同时重新对采取措施后的风险开展估计，确认其风险水平是否可接受。但为保证用械安全，基于对主要剩余风险的避免，需要在说明书中提示以下信息：

1.本试剂盒检测结果仅供临床参考，不应作为患者个体化治疗的唯一依据，临床医生应结合患者病情、药物适应症、治疗反应及其它实验室检测指标等因素对检测结果开展综合判断。

2.警示及注意事项：产品说明中介绍了该产品检验方法的局限性及使用中的注意事项。