人类免疫缺陷病毒 1 型（HIV-1）DNA 检测试剂盒医疗器械产品注册技术审评报告

一、产品概述

（一）产品主要组成成分

本产品含有 HIV-1 DNA 反应液 A、HIV-1 DNA 反应液 B、HIV-1 DNA 内标溶液、阴性质控品、HIV-1 DNA 阳性质控品，主要组成 成分见表 1。

表 1 试剂盒主要组成成分

（二）产品预期用途

本产品用于体外定性检测人全血样本中的人类免疫缺陷病毒 1 型脱氧核糖核酸（ HIV-1 DNA）（仅 M 组）。

本产品仅用于 HIV-1 型感染的辅助诊断， 临床医生可参考 本产品检测结果，结合病例的实际情况及多方检查结果开展综 合判断。本产品检测结果仅供临床参考，不能单独作为确诊或 排除病例的依据。本产品不可作为血液或血液制品 HIV 筛查使 用。

（三）产品包装规格

24 人份/盒；48 人份/盒。

（四）产品检验原理

本产品利用荧光 PCR 技术，针对人类免疫缺陷病毒 1 型基 因设计特异性引物与探针，配以热启动 DNA 聚合酶等成分组成 核酸扩增试剂，使用荧光 PCR 仪开展 PCR 扩增，并检测荧光信 号，从而对 HIV-1 DNA 开展检测。

本产品添加了相关的防污染组分（尿嘧啶糖基化酶），其作 用机理是选择性水解断裂含有 dU 的双链或者单链 DNA 中的尿嘧 啶糖苷键，形成的有缺失碱基的 DNA 链，在碱性介质以及高温 下会进一步水解断裂，从而被消除。

二、临床前研究概述

（一）主要原材料

1. 主要原材料的选择

本产品生产工艺过程所用的主要原材料包括引物、探针、 热启动 Taq 酶、UDG 酶、dNTPs、含 HIV-1 DNA 内标片段的质粒、 8E5 细胞核酸。其中，引物、探针、热启动 Taq 酶、UDG 酶、含 HIV-1 DNA 内标片段的质粒、8E5 细胞核酸由申请人自行生产， dNTPs 为外购。申请人对主要原材料开展了供应商的选择，通过 功能性试验，筛选出合格供应商，并制定了各主要原材料的质 量要求并经检验合格。

2.企业参考品及质控品的设置

申请人设置了企业参考品包括阳性参考品、阴性参考品、  最低检测限参考品、精密度参考品。各项企业参考品综合用于  产品检测最低检测限、特异性与重复性评价。阳性参考品、最  低检测限参考品及精密度参考品为全血样本或培养物。阳性参  考品为不同型别及浓度水平的 HIV-1 DNA 阳性样本，阴性参考  品分别为甲型流感病毒、 甲型肝炎病毒（ HAV）、 乙型肝炎病毒  （ HBV）、丙型肝炎病毒（ HCV）、巨细胞病毒（CMV）、EB 病毒（EBV） 及阴性全血样本。本产品设置了阴性质控品、HIV-1 DNA 阳性质  控品，用于监控 PCR 检测试剂及环境。

（二）生产工艺及反应体系研究

申请人通过研究试验，包括核酸提取研究、试剂用量研究、 反应条件研究、适用机型研究、样本要求等，最终确定最佳的生产工艺及反应体系。

（三）研究性能评估

本产品研究性能包括核酸提取纯化性能、最低检测限、精 密度、准确度、研究特异性（交叉反应、竞争性干扰与干扰物 质）、包容性等，申请人提交了有效运行的质量管理体系下生产 的 3 批产品在所有适用机型上的性能评估资料。

1.核酸提取纯化性能

在核酸提取纯化性能评估中， 申请人通过对提取试剂的核 酸纯度、提取效率、提取重复性、抗干扰能力开展验证，确认 试剂盒配合使用的提取试剂符合要求。

2.最低检测限

在最低检测限研究中，申请人通过对 5 个 HIV-1 M 组基因 型样本开展梯度稀释，对系列浓度样本分别开展 20 次重复检测， 研究结果为阳性检出率为 95%的浓度水平即最低检测限为 250 copies/mL；另外按照基于不同型别 HIV-1HIV-1 M 组样本开展验证， 确认本产品最低检测限为 250 copies/mL。

3.精密度

在精密度的性能评估中， 申请人在不同的适用机型上，使 用三批试剂对强阳性、临界阳性水平的 HIV-1 DNA 阳性样本及 HIV-1 DNA 阴性样本开展重复检测，评价批内、批间、日内、日间、不同操作者之间、实验室内、实验室间精密度。结果为强 阳性、临界阳性浓度的 HIV-1 DNA 阳性样本检测结果 CV%值小于 5%，HIV-1 DNA 阴性样本检测结果均为阴性。

4.准确度

在准确度的性能评估中， 申请人在不同的适用机型上，使 用三批试剂与已上市同类产品及一代测序对涵盖 9 种 HIV-1 M 组亚型的高、中、低浓度的 HIV-1 DNA 阳性临床样本及 HIV-1 DNA 阴性临床样本开展比较研究，结果符合要求。

5.研究特异性

在交叉反应及竞争性干扰中， 申请人对与人类免疫缺陷病 毒种属相近、引起症状相似或可能合并感染的其他病原体开展 检测，包括甲型流感病毒、甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、丙 型肝炎病毒、巨细胞病毒、EB 病毒、结核分枝杆菌、Ⅰ型单纯 疱疹病毒、Ⅱ型单纯疱疹病毒、水痘带状疱疹病毒、马尔内菲 青霉菌、人乳头瘤病毒、人细小病毒 B19、白色念珠菌、风疹病 毒、肺炎支原体、新生隐球菌、HIV-2 型、麻疹病毒、卡氏肺孢 子菌、弓形虫、鸟分枝杆菌，对不在本试剂盒检测范围内的 HIV-1 型 N 组及 HIV-1 型 O 组开展检测，结果显示本试剂盒与上述病 原体无交叉反应或竞争干扰。

在干扰物质评估中， 申请人对含高浓度干扰物质的样本开展检测，结果表明血红蛋白、胆红素、甘油三酯、总 G 型免疫 球蛋白、总 M 型免疫球蛋白、类风湿因子（RF）、抗核抗体（ANA）、 人抗鼠抗体（HAMA）、乙醇以及治疗性药物（拉米夫定、阿得福 韦、恩替卡韦、替必夫定、α-干扰素、依法韦仑、洛匹那韦、 多替拉韦钠片、艾博韦泰、阿奇霉素、利巴韦林、伐昔洛韦、 奥司他韦、阿昔洛韦、阿司匹林、洛索洛芬、布洛芬、甲氧苄 啶、异烟肼、利福平、阿米卡星、更昔洛韦、磺胺嘧啶、氟康 唑与地塞米松）对本产品的检测结果无干扰。

6.包容性

在包容性评估中， 申请人对不同来源、不同浓度的 HIV-1 M 组不同基因亚型的阳性临床样本开展考察，结果表明本产品可 以检测 HIV-1 M 组不同基因亚型。

（四）阳性判断值研究

阳性判断值的确定：按照基于来自不同地区有弄清楚诊断信息的 120 例临床样本开展研究，使用本产品开展检测，利用 ROC 曲线 法确定本产品目的基因的阳性判断值为 Ct 值≤43。

阳性判断值验证：按照基于来自不同地区有弄清楚诊断信息的 146 例临床样本开展验证，结果表明本产品阳性判断值设置可靠。

（五）稳定性研究

申请人对本产品的实时稳定性、开瓶稳定性、冻融稳定性、运输稳定性以及样本稳定性开展研究，确定了在各种条件下本 产品及样本的有效保存时间。

实时稳定性：使用企业参考品对三批试剂按照技术要求检 测开展研究；结果为试剂盒保存于-20±5℃, 有效期为 12 个月。

此外， 申请人对产品的开瓶稳定性、冻融稳定性、运输稳 定性与样本稳定性分别开展了研究，结果显示，产品的性能均 满足产品说明书声称的要求。

三、临床评价概述

申请人在武汉市传染病医院、福建医科大学孟超肝胆医院、 荆州市疾病预防控制中心与深圳市疾病预防控制中心共四家机 构完成了临床试验。本次临床试验共纳入 1269 例全血样本，主 要为疑似 HIV 感染的人群、HIV 感染的不同进展阶段的人群（包 括急性期、无症状感染期及艾滋病期病例）与抗体筛查阳性且 WB 结果不确定人群。临床试验共分为两部分：

第一部分：按照基于试验体外诊断试剂与 Sanger 测序开展比较 研究试验，验证本产品的临床性能。试验结果显示， 申报产品 与比较方法的阳性符合率为 100.00%[95%CI 99.35%~ 100.00%]， 阴性符合率为 99.12%[95%CI 98.09%~ 99.60%]， 总符合率为 99.53%[95%CI 98.97%~ 99.78%]。

第二部分：按照基于试验体外诊断试剂与临床参考标准开展比较研究试验，验证本产品的临床性能。试验结果显示， 申报产 品 与 临 床 参 考 标 准 的 阳 性 符 合 率 为  96.90%[95%CI 95.20%~ 98.00%] ，  阴 性 符 合 率 为  100.00%[95%CI 99.42%~ 100.00%]，总符合率为 98.50%[95%CI 97.67%~ 99.04%]。

，试验体外诊断试剂的临床试验结果满足技术审 评要求。

四、产品受益风险判定

申请人对已知危险（源）开展风险评价，按照风险可接受 准则判断每个危险(源）的风险是否达到可接受水平，对可靠可 行减少的风险、不经过风险/收益研究既判定为不可接受的风险 采取控制措施，并对具体措施开展实施验证， 同时重新对采取 措施后的风险开展估计，确认其风险水平可接受。但为保证用 械安全，基于对主要剩余风险的避免，需要在说明书中提示以 下信息：

1.预期用途：本产品用于体外定性检测人全血样本中的人 类免疫缺陷病毒 1 型脱氧核糖核酸（HIV-1 DNA）（仅 M 组）。

本产品仅用于 HIV-1 型（M 组）感染的辅助诊断， 临床医 生可参考本产品检测结果，结合病例的实际情况及多方检查结 果开展综合判断。本产品检测结果仅供临床参考，不能单独作 为确诊或排除病例的依据。本产品不可作为血液或血液制品 HIV筛查使用。

2.警示及注意事项：产品说明书中介绍了该产品检验方法 的局限性及使用中的注意事项。