近日，国家药监局发布了《人MTHFR基因多态性检测试剂注册审查指导原则》（2025年第4号），人MTHFR基因多态性检测试剂按照基于荧光探针PCR法，对预期或正在服用叶酸的高同型半胱氨酸血症患者的静脉全血或口腔拭子等样本DNA中的MTHFR基因多态性开展体外定性检测的试剂，用于叶酸的用药指导。一起来学习人MTHFR基因多态性检测试剂临床试验设计要点。
人MTHFR基因多态性检测试剂临床试验设计要点
临床试验的开展、方案的制定以及报告的撰写等均应符合相关法规及《体外诊断试剂临床试验技术指导原则》（国家药品监督管理局通告2021年第72号）的要求，如相关法规、文件有更新，临床试验应符合更新后的要求。
1.临床试验机构
应选择不少于3家（含3家）已备案的临床试验机构，按照相关法规、指导原则的要求开展临床试验。申请人应按照产品特点及预期用途，综合不同地区人种与流行病学背景等因素选择临床试验机构。临床试验机构应具有分子生物学方法检测的优势，操作人员应熟悉临床试验方案及检测系统的各环节。
2.临床试验方法
2.1对于有已上市同类产品（突变位点为C677T，rs1801133）的产品，建议申请人选择境内已批准上市的同类产品作为比较试剂，按照基于试验体外诊断试剂与之开展比较试验研究，评价申报产品的临床性能。比较试剂的选择应从预期用途、样本要求、检测性能等方面，确认其与申报产品具有较好的可比性。
2.2如申报新的突变位点用于叶酸用药指导，应按照其公认的临床意义，提供其适用人群相应的临床意义的证据及性能验证临床试验。性能验证临床试验中可以选择公认的参考方法（如Sanger测序法）作为比较方法，评价其突变位点的检测性能。临床意义的证据应包括新的突变位点基因型与血液同型半胱氨酸含量、红细胞中叶酸含量，服用叶酸剂量与相应结局的相关性研究证据。
针对Sanger测序与相关性研究研究方法（如涉及）的形成、验证与质量控制，应提交详细的研究论述，相关内容纳入临床试验报告中。
3.受试者选择与样本类型
3.1受试者选择
临床试验中应选择高同型半胱氨酸血症患者作为适用人群。如需要服用或正在服用叶酸的H型高血压等心脑血管疾病患者等。
如涉及新的位点及临床使用场景，应按照相应的适用人群纳入受试者。
3.2 样本类型
适用的样本类型一般为静脉抗凝全血，应按照基于一致样本类型的已上市同类产品开展比较研究。
如产品同时适用于口腔拭子，可与一致样本类型或静脉全血的已上市同类产品开展比较研究；也可按照基于与申报产品的静脉全血开展同源比对的方式开展评价，纯合突变型/杂合突变型/野生型样本例数建议均不少于100例。
临床试验中应以临床原始样本开展试验，不应直接按照基于提取的基因组DNA。临床样本的采集、处理、保存与提取等应同时满足申报产品说明书以及比较试剂说明书（如适用）的相关要求。
4.临床试验样本量
临床试验样本量应满足统计学要求，可按照基于适当的统计学方法开展估算，同时应满足法规最低样本量的要求。按照相应临床试验设计，本临床试验可依据申报产品相对于比较试剂的纯合突变型/杂合突变型/野生型符合率分别估算相应的最低样本例数。
与比较试剂的比较研究中，临床样本量的估算建议按照基于单组目标值法开展计算，纯合突变型/杂合突变型/野生型符合率的临床可接受标准（P0）建议均不低于95%。当评价指标PT接近100%时，该样本量估算方法可能不适用，应考虑选择更加适宜的方法开展样本量估算与统计学研究，如精确概率法等。
5.统计学研究
依据年龄、性别与临床诊断背景信息等，对纳入统计的病例开展人口学研究。
总结野生型、杂合突变型与纯合突变型的例数，以3×3表分别总结可归结成两种试剂的定性检测结果，并分别计算各基因型的符合率、总体符合率及其95%置信区间，对定性结果开展kappa检验，以评价可归结成两种试剂检测结果的一致性；以交叉四格表分别总结可归结成两种试剂对野生型及突变型（包括杂合突变型与纯合突变型）的定性检测结果，计算符合率、总符合率及其95%置信区间，并对定性结果开展kappa检验，以验证可归结成两种试剂检测结果的一致性。
对于可归结成两种试剂检测结果纷歧致的样本，应按照基于可靠方法开展复核，并对差异原因开展研究。
6.伦理学要求
临床试验必须符合赫尔辛基宣言的伦理学准则。研究者应考虑临床试验用样本的获得与试验结果对受试者的风险，提请伦理委员会审查，并获得伦理委员会的同意。注册申报时应提交伦理委员会的审查意见。
7.临床试验方案
各临床试验机构的方案设置应基本一致，且保证在整个临床试验过程中遵循预定的方案，不可随意改动。整个试验过程应在临床试验机构的实验室内并由本实验室的技术人员操作完成，申报单位的技术人员除开展必要的技术指导外，不得随意干涉实验进程。
试验方案应确定严格的入选/排除标准，任何已入选的样本被排除出临床试验都应记录在案并弄清楚说明原因。在试验操作过程与结果判定时应按照基于盲法以保证试验结果的客观性。
8.质量控制
临床试验开始前，建议开展临床试验的预试验，以熟悉并掌握相关试验方法的操作、仪器、技术性能等，最大限度控制试验误差。整个试验过程都应处于有效的质量控制下，最大限度保证试验数据的准确性及精密度。
9.临床试验小结与报告
临床试验的小结与报告应该对试验的整体设计及各个根本点给予清晰、完整的阐述，应该对整个临床试验实施过程、结果研究、结论等开展条理分明的描述，并应包括必要的基础数据与统计研究方法，最后得出临床试验结论。临床试验报告的撰写参考《体外诊断试剂临床试验技术指导原则》的相关要求。
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