一、产品概述
（一）产品主要组成成分
1支5mL的VENTANAanti-PMS2(A16-4)抗体分配器含有约 5μg 的鼠单克隆抗体。抗体已经过含有 3%载体蛋白与0.05%ProClin300（防腐剂）的PBS稀释处理。特异性抗体浓度约为1μg/mL。（具体内容详见产品说明书）
（二）产品预期用途
本产品用于体外定性检测经福尔马林固定、石蜡包埋（FFPE）的实体瘤组织切片中的PMS2蛋白。PMS2（A16-4）抗体试剂（免疫组织化学法）需与 MSH2（G219-1129）抗体试剂（免疫组织化学法）、MLH1（M1）抗体试剂（免疫组织化学法）以及MSH6（SP93）抗体试剂（免疫组织化学法）一起使用，预期作为辅助识别适合帕博利珠单抗注射液（可瑞达/Keytruda）治疗的实体瘤患者的伴随诊断。
（三）产品包装规格
50测试/盒。
（四）产品检验原理
VENTANAanti-PMS2(A16-4)抗体是针对一种重组PMS2蛋白而产生的一种鼠单克隆抗体。VENTANAanti-PMS2 (A16-4)抗体与FFPE组织切片中的PMS2 蛋白结合。可以使用一种半抗原化的二抗以及随后使用一种多聚体抗半抗原-HRP偶联物（DAB染色液，OptiViewDABIHCDetectionKit与DAB染色增强液，OptiView Amplification Kit（50次检测）或（250次检测））对该抗体开展定位。然后，通过沉淀酶反应产物使特异性抗体-酶复合物可见。每个步骤都以精确的时间与温度孵育。在每一步孵育结束时，BenchMarkULTRA或Benchmark ULTRAPLUS仪器都会冲洗切片，以停止反应并去除未结合物质，这是因为未结合物质会阻碍后续步骤中所需的反应。还应用了缓冲液（ULTRALCS（Predilute））将样本载玻片中液体试剂的蒸发降至最低。
除了按照基于VENTANAanti-PMS2 (A16-4)抗体染色外，还应使用鼠单克隆阴性试剂-鼠单克隆阴性质控抗体对第二张载玻片开展染色。阴性试剂质控品用于评估背景染色。
二、临床前研究概述
（一）主要原材料
1.主要原材料的选择
该产品的主要原材料为抗 PMS2（A16-4）小鼠单克隆抗体，该抗体为重组抗体，由外购获得，申请人选择有资质的供应商，并结合原材料特性，通过功能性实验，确定了原材料的质量要求，并检验合格。
2.质控设置情况
该产品弄清楚了检测过程中的质量控制程序，推荐了内部阳性质控、阳性组织质控与配套使用的阴性试剂质控品，具体见说明书【检测方法】部分。
（二）生产工艺及反应体系研究
申请人对工艺的研究包括工艺运行与工艺性能两方面。通过工艺运行研究，确定合适的混合时间，并在此基础上开展工艺性能研究，结果符合接受标准。
以前期研究结果为形成依据，申请人对各个染色条件开展了优化，最终在BenchmarkULTRA平台上确定了最佳的反应体系。
（三）研究性能评估
本产品的研究性能包括免疫反应性、灵敏度与特异性、准确度与精密度研究。
1.免疫反应性研究
申请人对正常人体组织开展免疫反应性研究，并对着色位置及特点开展记录，每种组织类型均不少于3 例。在检测的组织类型中并没有通过了解到超出预期的结果，结果总结见下表:
表1正常组织免疫反应检测结果
组织 | 阳性病例数量/总体病例数量 | 组织 | 阳性病例数量/总体病例数量 |
肾上腺 | 3/3 | 肺 | 3/3 |
膀胱 | 3/3 | 淋逢迎 | 3/3 |
骨髓 | 3/3 | 间皮 | 2/3 |
卵巢 | 4/4 | 胰腺 | 3/3 |
乳腺 | 3/3 | 甲状旁腺 | 3/3 |
小脑 | 3/3 | 周围神经 | 4/4 |
大脑 | 3/3 | 前列腺 | 3/3 |
宫颈 | 3/3 | 骨骼肌 | 2/3 |
组织 | 阳性病例数量/总体病例数量 | 组织 | 阳性病例数量/总体病例数量 |
结肠 | 3/3 | 皮肤 | 3/3 |
子宫内膜 | 3/3 | 脾 | 3/3 |
食道 | 3/3 | 胃 | 3/3 |
心脏 | 2/3 | 睾丸 | 3/3 |
垂体 | 3/3 | 胸腺 | 3/3 |
肠 | 3/3 | 甲状腺 | 4/4 |
肾脏 | 3/3 | 舌/唾液腺 | 3/3 |
肝脏 | 3/3 | 扁桃体 | 3/3 |
注：错配修复蛋白（如PMS2）存在于所有活跃的增殖细胞中。对于所有组织，在正常质控品细胞（淋巴细胞、成纤维细胞与上皮细胞）呈阳性染色的情况下，确定组织特异性成分的阳性/阴性染色结果。
申请人对35种相关良性、恶性病变组织（非正常组织）开展免疫反应性研究，并对着色位置及染色特点开展记录。在检测的肿瘤类型中没有通过了解到超出预期的结果，结果总结见下表：
表2 非正常组织免疫反应性检测结果
病理组织 | 阳性病例数量/总体病例数量 |
胶质母细胞瘤（大脑） | 1/1 |
室管膜瘤（大脑） | 1/1 |
少突胶质细胞瘤（大脑） | 1/1 |
浆液性腺癌（卵巢） | 1/1 |
腺癌（卵巢） | 1/1 |
胰腺神经内分泌肿瘤（胰腺） | 1/1 |
病理组织 | 阳性病例数量/总体病例数量 |
精原细胞瘤（睾丸） | 2/2 |
髓样癌（甲状腺） | 1/1 |
乳头状癌（甲状腺） | 1/1 |
导管原位癌（乳腺） | 1/1 |
微浸润性导管癌（乳腺） | 1/1 |
浸润性导管癌（乳腺） | 1/1 |
小细胞癌（肺） | 1/1 |
鳞状细胞癌（肺） | 1/1 |
神经内分泌癌（食道） | 1/1 |
印戒癌（胃） | 1/1 |
腺癌（小肠） | 1/1 |
间质肉瘤（小肠） | 1/1 |
腺癌（结肠） | 1/1 |
腺癌（直肠） | 1/1 |
胃肠道间质瘤（GIST）（直肠） | 1/1 |
肝母细胞瘤（肝脏） | 1/1 |
透明细胞癌（肾脏） | 1/1 |
腺癌（前列腺） | 1/1 |
鳞状细胞癌（宫颈） | 1/1 |
胚胎性横纹肌肉瘤（横纹肌） | 1/1 |
鳞状细胞癌（皮肤） | 1/1 |
神经母细胞瘤（腹膜后） | 1/1 |
间皮瘤（腹膜） | 1/1 |
B细胞淋巴瘤；NOS（淋逢迎） | 2/2 |
霍奇金淋巴瘤（淋逢迎） | 1/1 |
平滑肌肉瘤（膀胱） | 1/1 |
骨肉瘤 | 1/1 |
平滑肌肉瘤（平滑肌） | 1/1 |
病理组织 | 阳性病例数量/总体病例数量 |
神经纤维瘤 | 2/2 |
注：错配修复蛋白（如PMS2）存在于所有活跃的增殖细胞
中。对于所有组织，在正常质控品细胞（淋巴细胞、成纤维细胞与上皮细胞）呈阳性染色的情况下，确定肿瘤细胞的阳性/阴性染色结果。
2.灵敏度
按照基于不同器官系统的实体瘤人群的组织样本中dMMR的出现率来评估检测灵敏度。泛肿瘤组织样本中MMR缺陷型的出现率均小于6%，PMS2 缺失病例的总体患病率百分比为1.36%出现率。
3.研究特异性
通过免疫印迹研究，对该产品的特异性开展了评估，证明抗体能够特异性检测预测分子量的蛋白质。在PMS2野生型细胞系中显示了预期分子量（~96kDa）条带。PMS2敲除细胞系中没有通过了解到预期条带。该结果显示了申报产品的特异性。
对该产品开展了肽抑制的研究。研究表明，该产品的结合表位包括在PMS2的肽序列中，申报产品可以特异性结合目标表位。
4.准确性
开展了与基于PCR方法的MSI检测试剂的实体瘤的比对研究，在135 例实体瘤样本中，总体符合率为98.5%（95% CI：94.8%，99.6%），阳性符合率为98.5%（95% CI：91.8%，99.7%），阴性符合率为98.6%（95% CI：92.3%，99.7%）。所有符合率
均在90%以上，并且95% CI下限也均在90%以上。
开展了相对于他一致方法学抗体试剂的方法学比对研究。在1335 例实体瘤样本中，对于PMS2，阳性一致率为99.42%（95%CI：96.80%，99.90%），阴性一致率为99.74%（95% CI：99.24%，99.91%），总体一致率为总符合率为99.70% （95%CI: 99.23%,
99.88%）。
5.精密度
申请人在适用仪器上开展了实验室内精密度研究，包括批间，批内/运行内、日内、日间研究；阅片一致性研究，包括不同阅片员之间、同一阅片者不同阅片时间研究；外部重复性研究，包括不同实验室之间、不同阅片员间以及不同染色日间精密度研究，该研究在3 个不同的实验室完成。上述研究结果表明该试剂检测精密度良好。
（四）阳性判断值研究
通过药物临床试验确定该产品的阳性判断值。有效性结果显示，在既往标准治疗失败的MSI-H/dMMR肿瘤患者中，帕博利珠单抗治疗在ORR及持续缓解方面均具有临床意义的获益。VENTANAMMRRxDxPanel适用于鉴别可接受帕博利珠单抗治疗的中国患者。VENTANAMMRRxDxPanel能够有效筛选适合接受帕博利珠单抗治疗的dMMR型实体瘤患者。
该产品需与MSH2（G219-1129）抗体试剂（免疫组织化学法）、MLH1（M1）抗体试剂（免疫组织化学法）以及MSH6（SP93）抗体试剂（免疫组织化学法）一起使用，联合判读，确定患者的MMR 状态，即：
完整型 | 缺陷型 |
检测组合中所有4 个标志物（MLH1、 PMS2、MSH2与MSH6）均表现出完整的蛋白表达 | 检测组合中至少1 个标志物（MLH1、 PMS2、MSH2与MSH6）表现出蛋白表达缺失 |
（五）稳定性研究
申请人对申报产品的实时稳定性、使用稳定性与运输稳定性开展了系统的研究，确定了在各种条件下试剂的有效保存时间，同时也对样本稳定性开展了研究。
实时稳定性:使用三批2℃~8℃保存的试剂盒，分别在第0天、第6个月、第 14个月、第20个月与第26个月对结肠癌与直肠癌组织开展染色，结果符合接受标准。因此确定申报产品在2～8℃条件下保存，有效期 12 个月。
此外，样本稳定性与试剂运输及使用稳定性研究结果支持说明书声称。
三、临床评价概述
申请人在辽宁省肿瘤医院、上海交通大学医学院附属仁济医院、华中科技大学同济医学院附属同济医院、中山大学肿瘤防治中心、浙江大学医学院附属第二医院共5家临床机构完成了临床试验，同时通过桥接试验以及同步开发的方式完成了伴随诊断意义的研究。本次临床试验分为如下三部分。
第一部分：按照基于试验体外诊断试剂与比较试剂开展比较研究，评价试验体外诊断试剂的临床检测性能。
比较试剂选择已上市、具有良好可比性的PMS2 抗体试剂（免疫组织化学）。临床试验共入组1618 例实体瘤患者，样本类型为FFPE样本。其中，结直肠癌402 例，胃癌369 例，子宫内膜癌413 例，其他实体瘤434 例。试验结果显示，PMS2判读结果的阳性符合率为99.28%（95%CI：97.41%，99.40%），阴性符合率为99.70%（95%CI：99.24%，99.88%）。
联合其他3 个标志物（MLH1、MSH6、MSH2）共同判读MMR蛋白状态，判读结果的阳性符合率为 99.81%（95%CI：98.95%，99.97%），阴性符合率 99.72%（95%CI：99.19%，99.91%）。
第二部分：相对于他 3个标志物（MLH1、MSH6、MSH2）联合，通过桥接研究，评价4 项标志物联合检测对于帕博利珠单抗的伴随诊断性能。
按照基于本产品与根本药物临床试验CTA开展一致性研究，共入组943 例样本，阳性样本277 例，阴性样本666 例，其中包括药物根本临床试验样本、肿瘤库样本等。样本类型为FFPE样本。结果显示：试验体外诊断试剂与CTA的阳性符合率为72.2%（95%CI ：66.7%，77.1%），阴性符合率为98.5%(95%CI：97.3%，99.2%)。
此外，纳入根本药物临床试验样本开展桥接试验，本次桥接纳入病例203 例，试验体外诊断试剂检测阳性为134 例。对于药物临床试验中的主要评价指标，上述134 个样本来源病例的客观缓解率（ORR）为 40.3%(95%CI：31.9%，49.1%)，与药物临床试验结果基本一致；对于药物临床试验中的次要评价指标也开展了充分评价，结果显示，上述134 个病例的次要评价指标的结果也与药物临床试验中结果基本一致；同时，针对脱落样本开展敏感性与插补研究。
第三部分：相对于他 3个标志物（MLH1、MSH6、MSH2）联合，按照基于与抗肿瘤药物同步开发的方式，评价4 项标志物联合检测对于帕博利珠单抗的伴随诊断性能。
申请人提供了 KEYNOTE-158L队列的药物临床研究资料。该临床试验是一项多中心、开放性根本性Ⅱ期研究，评估该药物在中国既往一线治疗失败局部晚期或转移性dMMR/MSI-H 型实体瘤患者中的有效性与安全性。在这项临床试验中，共入组 30例 dMMR/MSI-H型实体瘤患者纳入了有效性统计研究，其中21例按照基于4项标志物联合检测为dMMR患者。多中心临床试验结果显示：ORR为 66.7%（95%CI：47.2%，82.7%）。
，临床试验结果显示该产品临床性能满足临床要求。
四、产品受益风险判定
经综合评价，本产品的受益与风险总结如下：
通过性能验证以及临床试验证明了本产品的研究性能及临床性能，可支持其在临床研究中的预期用途，保证其有效与安全使用。
PMS2 (A16-4)抗体试剂（免疫组织化学法）的预期收益是 与MSH2 (G219-1129)抗体试剂（免疫组织化学法）、MLH1（M1）抗体试剂（免疫组织化学法）以及抗MSH6 (SP93)抗体试剂（免
疫组织化学法）一起使用，预期作为辅助识别适合KEYTRUDA（帕博利珠单抗）治疗的实体瘤患者的伴随诊断。
当按照其规定的预期用途使用时，器械将实现其预期临床受益。产品受益超过其剩余风险。风险管理计划已得到适当实施，并制定了获取生产与生产后信息的方法。
为保证用械安全，基于对主要剩余风险的避免，在说明书中提示以下信息：
1. 本产品用于体外定性检福尔马林固定、石蜡包埋（FFPE）的实体瘤组织切片中的 PMS2 蛋白。PMS2(A16-4)抗体试剂（免疫组织化学法）与MSH2(G219-1129)抗体试剂（免疫组织化学法）、MLH1（M1）抗体试剂（免疫组织化学法）以及抗MSH6 (SP93)抗体试剂（免疫组织化学法）一起使用，预期作为辅助识别适合KEYTRUDA（帕博利珠单抗）治疗的实体瘤患者的伴随诊断。VENTANAMMRRxDxPanel的结果应由有资质的病理学家结合组织学检查、相关临床信息以及适当的质控开展解释。本抗体预期供体外诊断（IVD）使用。
2. 警示及注意事项如下：
VentanaMedicalSystems,Inc.提供最佳稀释度的抗体与试剂，以便按照提供的说明使用。偏离染色方案中列出的推荐抗原修复（细胞前处理）条件可能造成预期结果无效。应当使用适当的质控品并记录在案。偏离所列染色方案的用户必须承担对患者结果解释的责任。
VENTANAanti-PMS2(A16-4)抗体仅获准在 BenchMark ULTRA与 BenchMarkULTRAPLUS仪器上与 DAB染色液（OptiViewDABIHCDetectionKit）与DAB染色增强液（OptiViewAmplificationKit）联合使用，未获准与任何其他检测方法或自动化染色仪器联合使用。
在说明书中强调了可能难以判读的染色情况的结果研究。
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